Aplicação de frasco de soro
O frasco de soro é feito de vidro borossilicato de baixa extração e o frasco transparente incolor atende aos requisitos da USP Tipo I e ASTM E 438 Tipo I Classe A padrão. Pode ser autoclavado a 121 graus por 20 minutos e pode ser dividido em 125 ml , 250ml, 500ml, 1L, 2L de acordo com o volume.
A garrafa de soro é um recipiente para armazenamento de soro, que geralmente é feito de material PET pelo processo de sopro de estiramento de injeção. O meio é o nutriente necessário para o crescimento celular. De acordo com sua origem, é dividido em meio sintético e meio natural, ambos podem ser armazenados em frascos de soro.
Frasco de soro
Meio natural:
O meio natural mais utilizado é o soro, basicamente soro de vitela. O soro contém uma variedade de fatores de crescimento celular, fatores promotores de adesão e suas substâncias multiativas. Combinado com meio sintético, as células podem proliferar e crescer suavemente. O soro precisa ser armazenado em frascos especiais de soro de -5 graus a -20 graus .
Meio sintético:
O meio sintético é formulado estritamente de acordo com o tipo e a quantidade de substâncias exigidas pelas células. Existem muitos tipos e componentes conhecidos, o que facilita o controle das condições experimentais. Contém carboidratos, aminoácidos, lipídios, sais inorgânicos, vitaminas, oligoelementos e fatores de crescimento celular. No entanto, em comparação com o meio natural, alguns componentes naturais desconhecidos não podem ser substituídos por componentes químicos conhecidos. Portanto, o meio sintético básico utilizado na cultura de células também deve adicionar uma certa quantidade de componentes do meio natural para superar a cultura sintética. Base insuficiente, a prática mais comum é adicionar soro de bezerro.
O formato do frasco de soro é quadrado, fácil de agarrar, resistente à maioria das corrosão ácida e alcalina, a temperatura de fragilização é de -70 graus, e ainda tem uma certa tenacidade a -30 graus. É um bom recipiente de embalagem, seja de meio natural ou de cultura sintética. pode ser armazenado em frascos de soro.
Para o isolamento, cultura e identificação de células progenitoras endoteliais do sangue do cordão umbilical humano e o estabelecimento de estruturas vasculares acelulares por método melhorado de congelamento-descongelamento
Explorar a viabilidade e o valor da aplicação clínica de células progenitoras endoteliais isoladas e cultivadas a partir de sangue de cordão umbilical humano.
Métodos: O sangue do cordão umbilical dos fetos submetidos à cesariana a termo no Departamento de Obstetrícia e Ginecologia do Primeiro Hospital Afiliado da Faculdade de Medicina de Bengbu foi coletado, colocado em frasco de soro contendo 50U/ml de heparina sob condições assépticas, armazenadas em caixa de gelo de 4 graus e transportadas para as células Na sala de cultura, as células mononucleares do sangue do cordão umbilical foram obtidas por centrifugação em gradiente de densidade. As células mononucleares obtidas foram divididas em duas partes e foram adicionados meio M199 de soro de vitela fetal (FCS-M199) e meio M199 de soro autólogo (AS-M199). E eles foram semeados em placas de cultura com e sem fibronectina humana (HFN) (marcadas como: F(0), F(1), A(0), A(1)), respectivamente. Indução, diferenciação e expansão in vitro foram realizadas.
As alterações morfológicas das células aderentes durante todo o processo de indução e diferenciação foram observadas e identificadas a partir de diferentes ângulos combinados com técnicas relacionadas, como imuno-histoquímica, imunofluorescência e citometria de fluxo.
Resultados: Após 12 dias de cultura, as células mononucleares do sangue de cordão começaram a aderir. Após 3d, a forma do fuso começou a aparecer e, em seguida, o número de células aderentes aumentou gradualmente e gradualmente tornou-se em forma de fuso. Quando cultivada por até uma semana, uma colônia típica se formou com células fusiformes ao redor e células redondas no centro. Quando as células foram cultivadas por 14 dias, os aglomerados celulares interconectados gradualmente se conectaram e formaram uma estrutura semelhante a uma rede. Ao mesmo tempo, com o aumento contínuo do tempo de cultivo, as células fusiformes longas também começaram a diminuir gradativamente, e mostraram uma mudança típica de pedra de pavimentação.
As células aderentes foram cultivadas por uma semana e observou-se que o número de células no meio com fibronectina humana foi significativamente maior do que sem fibronectina humana, e não houve alteração significativa no número de células nos dois meios diferentes.
