As placas de cultura celular são consumíveis comumente usados e importantes em experimentos de cultura celular porque podem economizar tempo e materiais reagentes para experimentos celulares e podem configurar várias variáveis dinâmicas ao mesmo tempo para facilitar a observação e a detecção.
placa de cultura
1. As tampas das placas de cultura de poços 96, 24- ou placas de Petri são muito soltas, o que é conveniente para a ventilação, mas bactérias, fungos e outros poluentes também podem entrar?
Resposta: (1) A capa é bem solta e pertence à cultura semiaberta. O objetivo disso é respirar (na verdade, permitir que o CO2 fora da placa de cultura seja totalmente trocado com a placa de cultura para manter o valor de pH do meio).
(2) Existem vantagens e desvantagens, o que aumenta a possibilidade de poluição. Além disso, isso faz com que o líquido na placa de Petri evapore, o que é notável para a dosagem precisa de medicamentos. Portanto, as duas medidas a seguir são necessárias:
a) O ar da incubadora deve estar limpo (luz ultravioleta regular, esfregar com álcool e a incubadora deve ser ligada e desligada o mínimo possível)
b) A umidade na incubadora deve ser mantida em 100 por cento em todos os momentos (uma pia na qual a água destilada estéril é colocada na incubadora). Preste atenção à operação asséptica!
2. Minhas células são inoculadas na placa de cultura, e as células sempre se juntam na parte periférica. O que devo fazer? Vejo que as celas de alguns camaradas de armas estão reunidas no meio. É um problema com a qualidade da placa?
A: Como você mistura suas células? É pipeta soprando ou agitando a placa de cultura? Se for este último, e for agitado em círculo, é muito provável que as células sejam lançadas para a parte circundante devido à força centrífuga, resultando no meio das células. Menos, mais de quatro semanas! Você pode tentar você mesmo!
Uma boa maneira: antes de cultivar a placa de sementes, coloque a placa de cultura na incubadora por algumas horas de saturação e depois retire-a. Ao semear as células, a força deve ser leve. Você pode usar um gotejador na lateral do orifício da placa de cultura. Adicione lentamente para permitir que a suspensão de células flua para os poços da placa e as células cultivadas cresçam de maneira substancialmente uniforme. Lembre-se de nunca agitar o oscilador ou suas células se agruparão como você disse.
3. Minhas células são passadas normalmente, mas quando um tipo vai para uma placa de seis poços (independentemente da adição de drogas e controle), sempre há dois ou três poços (aleatórios) de células que não crescem bem, são pequenas e parecem para ser quebrado. Alguém encontrou isso? Qual é a razão?
R: Pode estar relacionado à temperatura do líquido que você adiciona. Se suas células acabaram de ser retiradas para trocar o meio e adicionar o meio, e o meio também for retirado da geladeira de 4 graus em breve, é fácil que as células congelem até a morte. Recomenda-se que você incube melhor o meio na incubadora por 15 minutos primeiro.
Além disso, também está relacionado ao estado de crescimento de suas células. As células antes da dosagem podem ser incubadas com altas concentrações de soro. Certifique-se de que as células estão em boas condições.
Ou pode ser incubado em banho-maria de 37-graus, ou o problema da própria placa de cultura, você pode tentar outra placa de cultura. Outra possibilidade é o problema do estado celular, ajuste a concentração de soro ao semear a placa.
4. Nos últimos dias, usei uma placa de cultura de seis poços para inocular células. Depois de cultivar por 24 horas, troquei o meio. Antes de trocar o meio, observei que as células aderiram à parede, e o estado era muito bom. Depois de trocar o meio, usei o microscópio imediatamente. Observou-se que quase metade das células em cada poço apresentou um estado de quase morte. As células ficam muito pequenas e produzem muitos detritos, enquanto a outra metade das células é normal, há um divisor de águas entre células anormais e células normais, a metade superior do círculo é boa, a metade inferior do círculo não é boa, como é esse? Qual é o problema?
R: Você pode ver se há algum dos seguintes motivos
a. A placa de cultura não é colocada horizontalmente;
b. E quanto ao seu meio de cultura, se o meio de cultura expirar, as células não irão aderir. Experimente um meio preparado na hora
c. Pode ser problema da placa. Não há problema em trocar a placa de outra marca ou usar o frasco de cultura.
d. Você prestou atenção na influência do ventilador ao trocar o meio, principalmente quando há muitas placas de cultura que precisam ser substituídas, é fácil fazer com que as células encolham e se rompam devido ao vento e perda de água. Nesse caso, o meio deve ser trocado um a um, e não tenha medo de desperdiçar a pipeta, atente para a eficiência da operação!
5. Já se passaram quatro dias desde que as células foram digeridas e inoculadas em uma 24-placa de poços, e a parte do meio de cada poço estava sempre cheia. O meio foi lavado com PBS todos os dias, e a mesma situação ocorreu quando o meio foi trocado no dia seguinte. As bordas são bem compridas e o centro cheio de células mortas?
Resposta: Se as células são densas ao redor e esparsas no meio, existem aproximadamente as seguintes razões:
O meio foi adicionado muito pouco. Principalmente devido ao problema da tensão do líquido.
Se há menos água no fundo da incubadora;
A agitação após a semeadura celular foi demais. As células são distribuídas devido à força centrífuga.
A chave para saber se as células estão distribuídas uniformemente é que cada tipo de célula tem diferenças individuais e as operações celulares de outras pessoas podem não ser adequadas para você. Portanto, você deve explorar por conta própria e encontrar um conjunto de regras que sejam exclusivas de suas próprias células. Você tem a seguinte experiência:
(1) Todas as suspensões de células a serem semeadas devem ser misturadas com uma pipeta antes da semeadura.
(2) De acordo com os registros, o volume de líquido da 24-placa de poços é de 1ml, na verdade, o volume de 1ml é suficiente.
(3) Ao inocular, adicione a amostra lentamente e lembre-se de girar levemente a ponta da pipeta. A amostra não pode ser adicionada muito rapidamente para evitar que as células se acumulem em um ponto de adição de amostra e preste atenção para adicionar amostras em partes diferentes, ou seja, ao adicionar a pistola móvel. Cabeça, fazer artificialmente as células tendem a ser distribuídas uniformemente. Isso tem o efeito de distribuir uniformemente as células.
