A tecnologia de PCR é semelhante ao processo de replicação natural do DNA, e sua especificidade depende de primers oligonucleotídicos complementares a ambas as extremidades da sequência alvo. A PCR consiste em três etapas básicas de reação: desnaturação, anelamento e extensão. Este processo de reação é realizado no recipiente de reação de PCR. Com o desenvolvimento contínuo do instrumento de amplificação de genes, o recipiente de reação também experimentou o desenvolvimento gradual do tubo de centrífuga de 1,5 ml para 0,2 ml (0,25 ml) para o {{ 7}}.2ml dedicado para PCR. , 0.1mlpcr tubo. Com o aumento do número de reações de amplificação por PCR, gradualmente são formados recipientes de amplificação de genes de alto rendimento para tiras de PCR e placas de PCR.
A PCR consiste em três etapas básicas de reação: desnaturação-recozimento-extensão
Desnaturação do DNA modelo:
Depois que o DNA molde é aquecido a cerca de 94 graus por um certo período de tempo, o DNA de fita dupla do DNA molde ou o DNA de fita dupla formado pela amplificação por PCR é dissociado, para que possa ser combinado com o primer para preparar para a próxima rodada de reação.
Recozimento (renaturação) do DNA modelo com primers:
Depois que o DNA molde é desnaturado em uma fita simples por aquecimento, e a temperatura é reduzida para cerca de 55 graus, os primers são pareados com a sequência complementar da fita simples do DNA molde.
Extensão de primers:
Sob a ação de Taq, o conjugado de DNA molde-primer usa dNTP como matéria-prima da reação para sintetizar uma nova cadeia de replicação semi-reservada complementar à cadeia de DNA molde de acordo com o princípio de pareamento de bases e replicação semi-reservada.
Princípios Básicos da Tecnologia PCR
A tecnologia se baseia em uma reação de síntese enzimática da DNA polimerase na presença de DNA molde, primers e quatro desoxirribonucleotídeos.
A DNA polimerase usa DNA de fita simples como molde para iniciar a síntese com um pequeno pedaço de DNA de fita dupla. Um ou dois primers oligonucleotídicos sintéticos são combinados com uma sequência complementar no molde de DNA de fita simples para formar um DNA parcial de fita dupla.
Sob uma temperatura e ambiente adequados, a DNA polimerase adiciona desoximononucleotídeo à extremidade 3'-OH do primer e usa isso como ponto de partida para se estender ao longo da direção 5'→3' do molde para sintetizar uma nova fita complementar de DNA.
A diferença entre tubos de PCR e tubos de centrifugação
Tubos de PCR:
A placa de reação de PCR é 96-poço ou 384-poço, que é especialmente projetada para reações em lote. O princípio é que a taxa de transferência da máquina de PCR e do sequenciador é geralmente 96 ou 384.
Tubo de centrifugação:
O tubo de centrifugação não é necessariamente um tubo de PCR. Existem muitos tipos de tubos de centrífuga de acordo com sua capacidade. Os mais usados são 1,5ml, 2ml, 5ml, 15 ou 50ml, e o menor (250ul) pode ser usado como tubo de PCR.
Como escolher tubos de PCR
Optamos por colocar os tubos de PCR na esperança de escolher o local mais preciso para a temperatura.
A posição mais precisa da temperatura deve ser a posição acima do sensor de temperatura sob o módulo (independentemente da temperatura imprecisa do sensor).
A posição do sensor de temperatura de diferentes instrumentos de PCR é diferente.
Por exemplo, AB 2720 tem apenas um no meio, MJ 200 tem três sensores, que são inferior esquerdo, meio e superior direito, Eppendorf deve estar na linha A ou H e Dongshenglong 811 tem três sensores de temperatura, B{{3} } deve ser selecionado , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, pois esses pontos são pontos pontuais de temperatura.
