Como diz o ditado, se um trabalhador quer fazer um bom trabalho, ele deve primeiro afiar suas ferramentas. A escolha dos consumíveis é muito importante para obter resultados satisfatórios do experimento de PCR. Ao analisar os resultados da PCR, geralmente nos concentramos na análise de primers, concentração de enzimas, temperatura e tempo, mas ignoramos que os consumíveis de PCR também são um dos fatores de influência. Existem muitos tipos de consumíveis de PCR, como escolher os consumíveis de PCR corretos? Aqui estão algumas perguntas para ajudá-lo a encontrar sua resposta.
consumíveis pcr
1. Por que os consumíveis de PCR geralmente são feitos de PP?
Seja PCR comum ou PCR quantitativo de fluorescência em tempo real (qPCR), geralmente seus consumíveis estarão em contato direto com reagentes ou amostras, portanto, materiais de alta qualidade e boas técnicas de processamento são necessários no processo de produção e preparação. Os consumíveis gerais são feitos de polipropileno (PP). O polipropileno (PP) é um material biologicamente inerte, a superfície não é fácil de aderir a biomoléculas e possui boa resistência química e tolerância à temperatura.
2. Como escolher tubos/placas de PCR com volumes diferentes?
Volumes comuns para tubos/placas de PCR:
• Tubo único/{{0}}tubo/12-tubo: 0.5mL, 0.2mL, 0,1mL
• {{0}}placa de poços: 0.2mL, 0,1mL
• {{0}}placa de poços: 0,02mL
Especificações para tubos/placas de PCR:
Selecione o produto apropriado de acordo com os requisitos experimentais específicos. O volume da maioria dos tubos de PCR pode atender aos requisitos das reações de PCR. As especificações de capacidade estão disponíveis em capacidade padrão e baixa capacidade. Geralmente, recomenda-se escolher primeiro os tubos de baixa capacidade. Como os tubos/placas do reator de baixo volume têm menos altura livre, a transferência de calor é melhorada e a evaporação é reduzida. Ao mesmo tempo, é necessário evitar adicionar muita ou pouca amostra ao adicionar amostras. Muito pode levar à diminuição da condutividade térmica, derramamento e contaminação cruzada, enquanto muito pouco pode causar perda por evaporação da amostra.
3. Qual é a diferença entre a tampa plana/cobertura convexa do tubo único ou 8-tubo de linha?
Quando o volume da amostra é pequeno, tubo único ou {{0}}tubos de tubo são os preferidos. No entanto, quando a exigência de volume de reação é grande, prevalecem os tubos simples e o volume pode chegar a 0,5 mL. Existem dois tipos de tubo único e tubo 8- com tampa plana e tampa convexa, cada um com suas próprias vantagens. A tampa plana fornece entrega precisa de sinal fluorescente para qPCR; fácil de escrever em marcadores. A tampa convexa está em contato com a tampa do instrumento de PCR para reduzir a deformação do tubo causada pela pressão; no entanto, afetará a transmissão de sinais fluorescentes e não pode ser aplicado a experimentos qPCR.
4. Quais são as diferenças nos cenários de uso de diferentes 96-placas de poços?
96-As placas de poço são geralmente divididas em placas sem aba, placas semi-arredondadas e placas com aba completa.
Placas sem saia: compatíveis com a maioria dos termocicladores ou máquinas qPCR, mas não adequadas para aplicações automatizadas. A estabilidade não é alta durante o processo de pipetagem e precisa ser usado com um suporte de placa.
Placa semi-saia: Pode ser adaptada para etiquetar ou aplicar código de barras, e aplicação automática, e possui boa estabilidade de pipetagem.
Placa de saia completa: muito adequada para aplicações laboratoriais automatizadas, mas também adequada para aplicações de etiquetas e códigos de barras. Boa resistência mecânica, adequado para máquinas de PCR com módulos salientes e alta estabilidade durante a pipetagem.
5. O material da placa/tubo de PCR é mais espesso e mais estável?
não. Os consumíveis de PCR devem ter uma espessura de parede uniforme para fornecer transferência de calor consistente. A parede ultrafina do tubo é 50% mais fina do que a versão padrão, o que pode reduzir ainda mais a barreira térmica, resultando em uma resposta mais rápida e melhor.
6. Para placas 96-poço ou 384-poço, por que os cantos cortados e os rótulos não são os mesmos?
Corte de canto: A escolha da posição de corte de canto da placa PCR depende dos requisitos do instrumento adaptado para facilitar o posicionamento.
Identificação: As marcações alfanuméricas nas placas de PCR ajudam a identificar poços individuais e locais de amostra. Geralmente, é um logotipo de número colorido em relevo ou um logotipo gravado. Para alguns experimentos de aplicação automatizada, a placa de reação com marcas impressas será melhor vedada.
7. Alguns poços da placa de PCR são salientes, enquanto outros são planos. Qual é o melhor?
O que é adequado é bom. Placas de PCR comuns têm dois tipos: bordas planas e bordas elevadas. Placa de reação com borda plana, adequada para a maioria dos termocicladores. A placa de reação na borda do orifício do riser é conveniente para vedação, o que pode reduzir o risco de contaminação cruzada entre as amostras.
8. Como escolher tubos/placas PCR de cores diferentes?
Para reações de PCR comuns, podem ser usadas as transparentes. Na reação de PCR em tempo real, a sensibilidade e a consistência do tubo branco são relativamente maiores. As paredes brancas do tubo impedem que a fluorescência passe pelas paredes do tubo e refração, evitando assim que a fluorescência passe para o módulo de aquecimento, seja absorvida pelo módulo ou reflita inconsistentemente. Comparado com tubos transparentes, sinais de fluorescência mais fortes e mais focados podem ser coletados no topo dos tubos brancos.
