Nossos métodos de operação, detalhes e explicações teóricas se tornarão as diretrizes para sua operação, como a colocação de soluções nutritivas e frascos de células; procedimentos de esterilização; Para aprender a operação correta, é necessário prestar atenção a eles na primeira vez.
Nutrir células como criar filhos
As células são realmente frágeis. É melhor verificar todos os dias para evitar fenômenos anormais, como falta de água, dióxido de carbono, falha de energia e temperatura insuficiente na incubadora. Também é necessário resolver esses acidentes a tempo de evitar maiores dores causadas por experimentos repetidos. .
Boas células devem ser semeadas a tempo
As células são passadas em lotes para que, mesmo que um lote falhe, haja um sobressalente. Pode não ser fácil para a pessoa média como o último. Mas esta é a lição do meu sangue. Uma vez que as células foram contaminadas, todo o exército foi eliminado. Naquela época, lamento não ter protegido a semente.
Cada célula tem suas próprias características e deve ser tratada de maneira diferente.
As células são iguais às dos humanos, e células diferentes têm características de cultura diferentes. Tenha cuidado no processo de cultivo. Linhagens celulares diferentes usam meios e soros diferentes.
Por exemplo, as células musculares lisas que crio são muito ativas e gostam de estar vivas. Em 2-3 dias, haverá uma grande população e não gosto de comer e beber muito. É realmente o melhor filho para criar. As células endoteliais e as células musculares lisas têm personalidades semelhantes, mas são muito anti-higiênicas e desleixadas. Existem muitas células secretoras neles, então eles precisam ser trocados e lavados com frequência. As células RAW264.7 também são muito alegres e muito comestíveis. É necessário alimentá-los com frequência. A dor de cabeça é que as células são facilmente ativadas. É bom que a mamadeira e o ambiente em que são cultivados estejam livres de endotoxinas, mas é difícil para mim como mãe satisfazê-los.
Preparando-se para o trabalho antes do treinamento
Incluindo o manuseio de consumíveis, configuração de reagentes, testes de esterilidade, etc.
Limpeza de vidrarias. Para vidraria (frasco de células, frasco contendo solução nutritiva, frasco pequeno de penicilina, etc.), primeiro use sabão em pó para limpar (preste atenção aos cantos mortos) e depois enxágue. Mergulhe na solução ácida por mais de 24 horas, depois enxágue com água limpa 10 vezes para remover a solução ácida residual. Garrafas, etc., agite vigorosamente durante o enxágue. Em seguida, embebido em água bidestilada por 24 h. Após a secagem, embrulhe e seque a 160 graus por 2 horas.
Configuração do reagente. Como um líquido para cultura de células, geralmente, pode ser usado mais do que água bidestilada. E preste atenção ao ajuste do valor do pH.
Testes de esterilidade. Use principalmente esterilização por filtro: como tripsina, antibióticos, solução G-418, vários meios, piruvato de sódio, glutamina, etc. Alguns podem ser autoclavados: PBS, D-Hank's, etc.
Os reagentes são armazenados em alíquotas
Incluindo solução nutritiva, pancreatina, soro, etc.
O soro é especialmente importante. O soro deve ser armazenado a -20 graus. Se um frasco não puder ser usado de cada vez, 40-50ml pode ser dispensado em frascos estéreis tratados com ácido ou até mesmo armazenado em frascos de penicilina. Geralmente, o soro fornecido pelo fabricante é estéril e não requer filtração estéril. Se for encontrada muita matéria suspensa no soro, o soro pode ser adicionado ao meio e filtrado em conjunto, e o soro não deve ser filtrado diretamente. (Sem efeito na cultura de células em circunstâncias normais)
O soro engarrafado deve ser descongelado gradualmente: a geladeira de 4 graus é completamente dissolvida e depois dividida em embalagens. Durante o processo de dissolução, deve ser agitado regularmente (cuidado para não formar bolhas de ar) para uniformizar a temperatura e a composição e reduzir a ocorrência de precipitação. Não descongele diretamente de -20 graus para 37 graus, pois a temperatura muda muito, o que pode facilmente causar coagulação e precipitação de proteínas.
A inativação por calor refere-se ao aquecimento do soro totalmente descongelado a 56 graus por 30 minutos. Depois que o banho de água subir para 56 graus, coloque o soro, espere a temperatura subir para 56 graus e conte o tempo, geralmente agite uniformemente uma vez a cada 5 minutos ou mais. O objetivo deste tratamento térmico é desativar os componentes do complemento no soro. A menos que seja necessário, esse tratamento térmico geralmente não é realizado porque causará um aumento significativo no sedimento e afetará a qualidade do soro. Preste atenção ao efeito da mudança do soro (incluindo lotes diferentes) nas células.
Forte senso de esterilidade
Antes do experimento, a bancada ultralimpa foi esterilizada por irradiação de luz ultravioleta por 30 minutos, a superfície da operação asséptica foi limpa com etanol 70% e o ventilador da bancada ultralimpa foi ligado por alguns minutos antes do início da operação experimental .
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