Requisitos básicos para coleta de espécimes
1. As amostras de casos hospitalizados são coletadas pela equipe médica do hospital onde estão localizados, e as amostras de contatos próximos são coletadas pela agência local de controle de doenças designada e instituição médica. Ao coletar espécimes, diferentes áreas de amostragem devem ser definidas de acordo com diferentes objetos de coleta. Pacientes com febre vão a clínicas de febre para tratamento e coleta de amostras. As instituições que não têm clínicas de febre devem estabelecer áreas de amostragem especiais para pacientes com febre e amostrar pacientes com febre e outros grupos de teste para evitar interseções. infecção. 2. Pessoas infectadas assintomáticas, pessoal de entrada e contatos próximos devem coletar esfregaços nasofaríngeos para teste de ácido nucléico durante o isolamento e observação. Duas amostras de esfregaço nasofaríngeo devem ser coletadas ao mesmo tempo quando o isolamento é liberado, e diferentes reagentes de detecção de ácido nucleico devem ser usados para o teste, respectivamente. Em princípio, o teste secundário é realizado por diferentes instituições de teste. 3. De acordo com as necessidades de testes clínicos e laboratoriais, várias amostras podem ser coletadas durante a hospitalização e o isolamento, e várias amostras, como trato respiratório, sangue e fezes, podem ser coletadas ao mesmo tempo. O pessoal de amostragem deve seguir estritamente as especificações de amostragem para coletar espécimes para garantir que a qualidade dos espécimes coletados atenda aos requisitos. Ao mesmo tempo, eles devem registrar as informações do candidato em detalhes e podem usar a leitura de código de barras e outros métodos de informação para coletar informações relevantes. 4. Para a triagem da população, os tubos de amostragem devem ser determinados de acordo com os requisitos dos reagentes usados para extração e detecção de ácido nucleico, e tubos de amostragem contendo agentes de inativação de vírus (sais de guanidina ou surfactantes, etc.) podem ser selecionados. A amostra usada para o isolamento do vírus deve ser colocada em um tubo de amostragem que não contenha o agente de inativação do vírus. 5. Itens e monitoramento ambiental devem ser baseados em fins de monitoramento e as necessidades de prevenção e controle para determinar os itens de amostragem, localização e quantidade, a amostragem deve seguir estritamente as especificações de amostragem.
(4) Tipos de espécimes coletados. Cada caso deve coletar amostras do trato respiratório agudo (incluindo amostras do trato respiratório superior ou amostras do trato respiratório inferior). Em casos graves, as amostras do trato respiratório inferior devem ser coletadas primeiro; amostras de fezes, amostras de sangue total, amostras de soro e amostras fecais podem ser coletadas de acordo com as necessidades clínicas. Amostra de urina. Artigos e espécimes ambientais são coletados de acordo com os requisitos de monitoramento.
Tipos de amostra: 1. Amostras do trato respiratório superior: incluindo esfregaços nasofaríngeos, esfregaços da garganta, etc. 2. Amostras do trato respiratório inferior: expectoração com tosse profunda, fluido de lavagem alveolar, fluido de lavagem brônquica, aspirado do trato respiratório, etc. 3. Amostras de fezes / anal Cotonetes: cerca de 10 gramas (do tamanho de um amendoim) devem ser coletados. Se não for conveniente guardar as amostras de fezes, podem ser coletados cotonetes anais. 4. Amostra de sangue: sangue anticoagulante, o volume de coleta é de 5ml, recomenda-se o uso de um vaso sanguíneo a vácuo contendo anticoagulante EDTA para coletar o sangue. 5. Amostras de soro: tente coletar amostras duplas de soro durante as fases aguda e de recuperação. O primeiro soro deve ser coletado o mais rápido possível (de preferência dentro de 7 dias após o início da doença), e o segundo soro deve ser coletado nas 3 a 4 semanas após o início da doença. O volume de coleta é de 5ml, sendo recomendado o uso de tubo de coleta de sangue a vácuo sem anticoagulante. As amostras de soro são usadas principalmente para a determinação de anticorpos e nenhuma detecção de ácido nucleico. 6. Amostra de urina: colete a urina do meio da manhã, o volume de coleta é de 2 ~ 3ml. 7. Amostras de superfície: incluindo alimentos importados da cadeia de frio ou mercadorias importadas nas superfícies internas e externas da embalagem, bem como ferramentas de transporte e armazenamento e outras peças que possam estar contaminadas pela coleta de esfregaço. 8. Amostras de esgoto: De acordo com a distribuição do sistema de drenagem dos locais de processamento e tratamento de produtos congelados importados em grande escala no porto marítimo, concentre-se na seleção da saída de esgoto, na coleta da rede de tubulação interna, na jusante do fluxo de esgoto ou no conexão com a rede de tubos municipal, etc. 2 a 3 pontos Bits são amostrados.
(4) Coleta e processamento de amostras
1. Swab nasofaríngeo: o amostrador apóia suavemente a cabeça da pessoa a ser coletada com uma mão e segura o swab com a outra. O esfregaço entra na narina e vai fundo ao longo da parte inferior da passagem nasal inferior lentamente. Como a passagem nasal é curva, não é aceitável. Força excessiva para evitar sangramento traumático. Quando a ponta do swab atingir a parede posterior da cavidade nasofaríngea, gire suavemente por uma semana (em caso de tosse reflexa, fique por um tempo), então retire lentamente o swab e mergulhe a cabeça do swab em 2 ～ 3ml solução de preservação de vírus (também pode ser Use solução salina isotônica, fluido de cultura de tecidos ou tampão de fosfato), descarte a cauda e rosqueie a tampa firmemente.
2. Cotonete faríngeo: a pessoa que está sendo coletada deve enxaguar a boca com soro fisiológico, e a pessoa que coleta deve umedecer o cotonete em solução salina estéril (é proibido colocar o cotonete na solução de preservação de vírus para evitar antibióticos causadores de alergia), e o pessoa a ser recolhida Incline ligeiramente a cabeça, abra a boca e faça um" ah" som, expondo as amígdalas de ambos os lados, passe o cotonete na base da língua, limpe as amígdalas de ambos os lados da pessoa com um pouco de força por pelo menos 3 vezes e, em seguida, limpe para cima e para baixo a faringe posterior por pelo menos Três vezes. Em seguida, mergulhe a cabeça do esfregaço em um tubo contendo 2 a 3 ml de solução de preservação de vírus (solução salina isotônica, fluido de cultura de tecidos ou solução tampão de fosfato também podem ser usados), descarte a cauda e rosqueie bem a tampa do tubo. O esfregaço da garganta também pode ser colocado no mesmo tubo que o esfregaço nasofaríngeo.
3. Extrato de nasofaringe ou extrato do trato respiratório: Use um coletor conectado a uma bomba de pressão negativa para extrair o muco da nasofaringe ou extrair as secreções respiratórias da traquéia. Insira a cabeça do coletor na cavidade nasal ou traqueia, ligue a pressão negativa, gire a cabeça do coletor e retire lentamente, colete o muco extraído e enxágue o coletor uma vez com 3ml de líquido de amostragem (você também pode usar um pediátrico cateter conectado a uma seringa de 50ml (coletor alternativo).
4. Expectoração com tosse profunda: após o paciente apresentar uma tosse profunda, colete a expectoração com tosse em um tubo de amostragem contendo 3ml de fluido de amostragem. Se o escarro não for coletado no fluido de amostragem, 2 a 3ml do fluido de amostragem podem ser adicionados antes do teste, ou um volume igual de suco digestivo de escarro pode ser adicionado. A fórmula da solução de armazenamento de suco digestivo de escarro é mostrada na Tabela 1.
Ao usar, diluir a solução de armazenamento para 50ml com água desionizada, misturá-la com o mesmo volume de escarro, ou consultar as instruções de uso do reagente, ou usar um volume igual de escarro com 1g / L de tampão fosfato contendo proteinase K para converter a expectoração.
5. Fluido de lavagem brônquica: insira a cabeça coletora da narina ou cavidade traqueal na traqueia (cerca de 30 cm de profundidade), injete 5ml de solução salina normal, ligue a pressão negativa, gire a cabeça coletora e retire lentamente, colete o muco extraído, E lave o coletor com a solução de amostragem uma vez, ou você pode usar um cateter pediátrico conectado a uma seringa de 50ml para substituir a coleção.
6. Fluido de lavagem alveolar: Após a anestesia local, insira o broncoscópio de fibra óptica pela boca ou nariz através da faringe no brônquio do lobo médio direito ou segmento lingual do pulmão esquerdo e bata com sua parte superior na abertura do ramo brônquico e adicione-o lentamente através do orifício da biópsia traqueal. A solução salina fisiológica bacteriana, 30-50ml de cada vez, total de 100-250ml, não deve exceder 300ml.
7. Amostra de fezes: Pegue 1ml de solução de processamento de amostra, pegue a amostra de fezes do tamanho de um grão de soja e adicione ao tubo, sopre suavemente e sugue 3 a 5 vezes, deixe repousar em temperatura ambiente por 10 minutos, centrifugue a 8000 rpm por 5 minutos e absorver o sobrenadante. Detecção. A solução de tratamento da amostra fecal pode ser preparada sozinha, e a fórmula é mostrada na Tabela 2.
A solução HANK' S ou outra solução salina isotônica, fluido de cultura de tecidos ou solução tampão de fosfato também podem ser usados para dissolver a amostra de fezes para preparar uma suspensão de fezes. Se o paciente apresentar sintomas de diarreia, tome 3 ~ 5ml da amostra fecal, pipete suavemente para misturar, centrifugue a 8.000 rpm por 5 minutos e absorva o sobrenadante para uso.
8. Cotonete anal: Use um cotonete estéril para inseri-lo suavemente no ânus 3 ～ 5 cm, em seguida, gire-o suavemente para fora, coloque-o imediatamente em um tubo de amostra com tampa de rosca externa de 15ml contendo 3 ～ 5ml de solução de preservação de vírus, descarte a cauda, e girar. Aperte a tampa do tubo.
9. Amostras de sangue: Recomenda-se o uso de tubos de coleta de sangue a vácuo contendo anticoagulante EDTA para coletar 5 ml de amostras de sangue. De acordo com o tipo de reagente de extração de ácido nucléico selecionado, use sangue total ou plasma para extração de ácido nucléico. Para separar o plasma, centrifugue o sangue total a 1500-2000 rpm por 10 minutos e colete o sobrenadante em um tubo de plástico com tampa de rosca estéril.
10. Amostra de soro: Colete 5ml de amostra de sangue com tubo de coleta de sangue de pressão negativa a vácuo, deixe em temperatura ambiente por 30 minutos, centrifugue a 1500-2000 rpm por 10 minutos e colete o soro em um tubo de plástico com tampa de rosca estéril.
11. Espécimes de superfície: Consulte o método recomendado nas" Especificações Técnicas para Monitoramento Ambiental do Novo Coronavírus no Comércio Agrícola (Market Trade) Market" (WS / T776-2021). Depois que a zaragatoa de amostragem estiver totalmente infiltrada com a solução de preservação do vírus, aplique-a novamente na superfície e, em seguida, aplique a zaragatoa. Colocar de volta no tubo de amostragem e mergulhar, retirar e aplicar a amostra novamente, repetir mais de 3 vezes. A amostragem distribuída multiponto é realizada em objetos com grandes superfícies.
12. Amostras de esgoto: Consulte os métodos recomendados nas" Especificações Técnicas para Monitoramento Ambiental do Novo Coronavírus no Mercado de Comércio Agrícola (Market Trade)" (WS / T776-2021). Ao coletar uma amostra de esfregaço de esgoto, mergulhe o esfregaço no esgoto adsorvido e remova o esfregaço. Coloque de volta o tubo de amostragem para encharcar, retire-o e mergulhe-o no esgoto novamente, repita mais de 3 vezes e conduza uma amostragem distribuída em vários pontos para cada local de amostragem de esgoto. Ao coletar amostras de água de esgoto, use garrafas plásticas de polietileno para coletar 1L ～ 1,5L de esgoto. Para coleta de esgoto maior que 1,5L, você pode usar baldes de plástico de polietileno ou equipamento de enriquecimento especial para amostras de água no local. Antes de coletar amostras de água de esgoto, elas devem ser bem misturadas e, em seguida, amostradas; caso o esgoto seja difícil de misturar bem e ocorra estratificação, a amostragem pode ser feita em camadas de acordo com a proporção do volume de água de cada camada.
13. Outros materiais: coletar de acordo com os requisitos e especificações do projeto.
(5) Embalagem de amostra
Depois que as amostras são coletadas, elas são embaladas em um compartimento de segurança biológica do laboratório de segurança biológica de segundo nível.
1. Todas as amostras devem ser colocadas em um tubo de coleta de amostra de tamanho adequado com uma tampa de rosca e uma gaxeta interna, que seja resistente ao congelamento, e bem apertada. O número da amostra, tipo, nome e data de amostragem são indicados na parte externa do recipiente. 2. Coloque as amostras seladas em uma bolsa selada, cada bolsa é limitada a uma amostra. Os requisitos de embalagem de amostra devem atender aos padrões correspondentes das" Regras técnicas para o transporte seguro de mercadorias perigosas por via aérea" ;. 3. Quando o transporte de amostras externas estiver envolvido, a embalagem de três camadas deve ser realizada de acordo com o tipo de amostras e as substâncias infecciosas da Classe A ou Classe B.
(6) Preservação de espécimes
As amostras usadas para isolamento de vírus e detecção de ácido nucléico devem ser testadas o mais rápido possível. As amostras que podem ser testadas em 24 horas podem ser armazenadas a 4 ° C; as amostras que não podem ser detectadas dentro de 24 horas devem ser armazenadas a -70 ° C ou menos (se não- Armazenar a 70 ° C em um refrigerador a -20 ° C). As amostras de soro podem ser armazenadas a 4 ° C por 3 dias, e podem ser armazenadas por um longo tempo abaixo de -20 ° C. Bibliotecas especiais ou contadores especiais devem ser configurados para armazenar as amostras separadamente.
(7) Enviar espécimes para inspeção
As amostras devem ser enviadas ao laboratório o mais rápido possível após a coleta e não devem ser colocadas em temperatura ambiente (25 ° C) por mais de 4 horas após a coleta. Se o transporte de longa distância for necessário, é recomendado o uso de gelo seco e outros métodos de refrigeração para armazenamento. Evite congelamento e descongelamento repetidos durante o transporte da amostra.
1. Enviar espécimes
Todos os casos originais ou iniciais de epidemias locais descobertos em várias províncias (regiões autônomas e municípios), casos-chave relacionados à epidemiologia dos primeiros casos, casos locais com fontes desconhecidas de infecção, casos importados do exterior, bens importados e ambientais relacionados amostras positivas, etc. Pelo menos 2 amostras devem ser coletadas em paralelo, uma é enviada a cada agência provincial de controle de doenças para teste, a outra é enviada para os Centros de Controle e Prevenção de Doenças da China para teste e revisão, e um formulário de envio de amostra está anexado (consulte o Apêndice 10-1). Novas cepas representativas isoladas de várias províncias devem ser prontamente enviadas aos Centros de Controle e Prevenção de Doenças da China para revisão e preservação.
2. Transporte de espécimes e cepas
(1) O transporte doméstico de novas cepas de coronavírus ou outros materiais biológicos potencialmente infecciosos é classificado como Classe A, e o número ONU correspondente é UN2814. A embalagem está em conformidade com a classificação PI620 do documento ICAO Doc9284" Instruções técnicas para o transporte seguro de mercadorias perigosas por via aérea" Requisitos de embalagem: As amostras ambientais pertencem à categoria B e o número ONU correspondente é UN3373. A embalagem atende aos requisitos de classificação PI650 do documento ICAO Doc9284" Regras técnicas para o transporte seguro de mercadorias perigosas por via aérea" ;; a embalagem padrão acima pode ser referida para transporte por outros meios de transporte. O transporte de novas cepas de coronavírus ou outros materiais potencialmente infecciosos deve ser tratado de acordo com os" Regulamentos administrativos sobre o transporte de espécies ou amostras de microorganismos altamente patogênicos (vírus) que podem infectar humanos" (anteriormente Despacho n.º 45 do Ministério da Saúde) para o" Certificado de autorização de transporte" .
(2) Transporte internacional As amostras ou cepas do novo coronavírus que são transportadas internacionalmente devem ser embaladas de maneira padronizada, passar pelos procedimentos pertinentes de acordo com os" Regulamentos sobre a Administração Sanitária e Quarentena de Entrada e Saia de Artigos Especiais" e cumpra os requisitos nacionais e internacionais relevantes.
(3) Recebimento e gerenciamento de amostras e cepas de vírus. Os espécimes transportados por via aérea chegam ao aeroporto de destino e são transportados em veículos de transporte profissional até a unidade de recebimento. Os espécimes transportados por terra são transportados por veículos profissionais. Os transportadores e destinatários deverão tratar das amostras. Sinal duplo para recebimento. As amostras e cepas do novo coronavírus devem ser gerenciadas por uma pessoa dedicada, registrar com precisão a origem, tipo, quantidade e número de registro das amostras e cepas, tomar medidas eficazes para garantir a segurança das cepas e amostras e prevenir estritamente uso indevido, uso malicioso, roubo e furto. Roubo, perda, vazamento e outros incidentes.
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Teste de laboratório do novo coronavírus
