O processo básico de detecção por PCR do novo coronavírus
1. Coleta de amostras: Coleta simultânea de amostras do trato respiratório superior (incluindo nasofaringe e orofaringe) e do trato respiratório inferior (incluindo escarro, aspirado traqueal ou lavado broncoalveolar) para detecção de nCoV por RT-PCR. Onde as amostras do trato respiratório inferior estiverem prontamente disponíveis: use EPI apropriado para coleta de amostras (observe amostras de URT para precauções de gotículas e exposição e amostras de LRT para precauções de transmissão pelo ar) Ao coletar amostras de URT, use swabs de amostragem de vírus (poliéster ou rayon estéril em vez de algodão) e meio de transporte de vírus. Não retire amostras das narinas ou amígdalas. Para pacientes com suspeita de nCoV, especialmente pneumonia ou pacientes graves, uma única amostra de URT não pode descartar o diagnóstico, e recomenda-se aumentar as amostras de URT e LRT.
2. Extração de ácido nucleico: instrumento de extração de ácido nucleico ou extração manual de ácido nucleico
1), sem necessidade de instrumentos, use extração manual
Equipamentos e consumíveis de laboratório necessários para extração de ácidos nucleicos e isolamento de amostras:
cabines de segurança biológica (funções: separação de amostras, fornecimento de pessoal, amostras e proteção ambiental),
Centrífuga refrigerada de alta velocidade desktop (função: velocidade maior ou igual a 12000RPM, análise de ácido nucleico, etc.),
Frigorífico de baixa temperatura (função: armazenamento de reagentes),
Banho de metal, pipeta (função: dosagem precisa),
Tubos de centrifugação esterilizados (função: separação de ácidos nucleicos, etc.),
Luvas de látex (função: antipoluição),
Etanol absoluto, isopropanol, DNase e água livre de RNase (água não tratada com DEPC).
3. Instrumento de extração automática de ácido nucleico: (extração automática, 32 amostras podem ser extraídas uma vez em 26 minutos)
A placa pré-instalada correspondente é carregada e extraída diretamente na máquina:
4. Detecção PCR quantitativa de fluorescência:
Equipamentos e consumíveis necessários: cabine de segurança biológica (função: preparação de amostras, fornecimento de pessoal, amostras e proteção ambiental),
Instrumento de PCR quantitativo de fluorescência (função: detecção e análise de amplificação de PCR),
Centrífuga refrigerada de alta velocidade de mesa (função: velocidade maior ou igual a 12000RPM),
Congelador de baixa temperatura (armazenamento de amostras a -86 graus , armazenamento de reagentes a -20 graus e 4 graus ),
oscilador, (misturar)
Pontas de pipeta graduadas (Função: Carregamento preciso), 1-10Tamanho ul
Tubos de centrifugação esterilizados (0.5/1.5/2ml),
0. Tubo/placa PCR de grau óptico de 0,2 ml (função: tubo de reação PCR),
Luvas de látex (função: antipoluição).
A extração de ácido nucleico, a configuração do sistema de reação e a interpretação dos resultados estão sujeitas às instruções do kit.
