Maneiras de evitar a contaminação celular: dicas de pipetagem que você precisa saber
Entre as muitas variáveis que são controladas na cultura celular, uma variável específica afeta todo o experimento: a contaminação. Um fator que contribui para a contaminação celular nem sempre está no radar e, embora possa afetar silenciosamente a saúde da célula e afetar os dados de medição, é a contaminação por pipetagem.
A escolha de pipetas, pontas de pipetas e programas de pipetagem recebe pouca atenção ao projetar experimentos. Mesmo uma solução geral (autoclavagem) para evitar a contaminação por pipetagem pode não ser tão eficaz quanto se acredita.
A primeira regra da cultura celular: evitar a contaminação. Por que a técnica estéril é tão importante para o sucesso da cultura celular?
A técnica asséptica é a única forma de obter resultados confiáveis e reprodutíveis. A poluição pode afetar o crescimento celular, o metabolismo e a saúde -- algo que os cientistas estão interessados em estudar. Linhagens de células contaminadas não têm as propriedades desejadas e funcionam de forma diferente a cada vez, dependendo da gravidade da contaminação. Além disso, se os contaminantes crescerem demais em suas células de interesse, você pode acabar estudando o organismo errado.
Que tipos de poluentes os cientistas costumam encontrar?
Fontes comuns de contaminação são bactérias, leveduras e fungos. No trabalho de cultura de células, o mais difícil de detectar e erradicar é o micoplasma. Tipos menos comuns de contaminação incluem, por exemplo, lixiviáveis plásticos em consumíveis de laboratório.
Quais são as causas comuns de contaminação celular?
Uma fonte comum de contaminação é a pipetagem inadequada, como o uso de pipetas contaminadas e ponteiras sem filtro. Além disso, a falta de boas práticas laboratoriais, como descontaminação inadequada de instrumentos como incubadoras ou câmaras de fluxo laminar, também é um problema. Para remover o micoplasma, a filtração é necessária usando um filtro 0.1 µm em vez de um filtro 0.2 µm.
Três contaminações por pipetagem:
1. Contaminação da pipeta para a amostra: A pipeta ou a ponta da pipeta contamina a amostra.
Como evitar:
Use pontas de filtro estéreis para evitar a contaminação do corpo da pipeta.
Troque a ponta da pipeta após cada amostra.
Autoclave ou esterilize as pipetas regularmente com etanol. Escolha uma pipeta compatível com autoclave.
2. Contaminação da amostra para a pipeta: A pipetagem da amostra para o corpo da pipeta contamina a pipeta.
Como evitar:
Use pontas de filtro ou pontas de deslocamento positivo para evitar que as amostras entrem no corpo da pipeta.
Ao pipetar, mantenha a pipeta na posição vertical. Armazene a pipeta na vertical.
Incline o frasco ao pipetar.
Solte o botão lentamente para evitar espirrar a amostra na pipeta. Escolha uma pipeta equipada com uma função de ejeção suave.
3. Contaminação entre amostras: As amostras residuais da pipetagem são transferidas para a próxima amostra. Geralmente ocorre quando a mesma ponta é usada várias vezes.
Como evitar:
Troque a ponta da pipeta após cada amostra.
Use pontas de filtro ou pontas de deslocamento positivo para evitar que a amostra entre no corpo da pipeta e vá para a próxima amostra.
Certifique-se de que a ponta da pipeta esteja selada na pipeta para evitar vazamento de amostra. Por exemplo, a dica de Yongyue Medical.
Existem fatores de contaminação que os cientistas podem nem estar cientes?
A eficiência da autoclavagem muitas vezes não é verificada e, se a autoclave não estiver funcionando corretamente, as pontas de pipetas autoclavadas podem não ser estéreis. Filtros pré-esterilizados embalados em embalagens protetoras são a opção mais segura para prevenir tais acidentes. O processo de pré-esterilização para pontas de pipetas de alta qualidade é regularmente validado para garantir a eficiência da pré-esterilização.
Como as ferramentas de pipetagem e distribuição tornam mais fácil para os cientistas manusear amostras em um ambiente estéril?
Escolher as pipetas e ponteiras certas pode facilitar o fluxo de trabalho asséptico. As pipetas médicas Yongyue são fáceis de limpar e abrir sem ferramentas, acelerando a limpeza diária. Como a autoclavagem é mais eficaz na remoção de contaminação do que lenços de etanol, as pipetas mecânicas Sartorius são totalmente autoclaváveis, o que significa que você pode descontaminar suas pipetas de forma confiável. A ejeção da ponta macia evita o risco potencial de contaminação por respingos quando a ponta é ejetada. As pontas de filtro pré-esterilizadas protegem suas amostras contra contaminação cruzada. As pontas médicas Yongyue também são embaladas em embalagens à prova de vazamentos, o que significa que qualquer contaminação nas condições de armazenamento e entrega não entrará em contato com as pontas ou a caixa de pontas.
Como os cientistas podem evitar a poluição? Quais são as suas principais dicas para o trabalho estéril?
Primeiro, boas práticas de laboratório e planejamento cuidadoso das etapas de trabalho. Certifique-se de manter apenas o que é necessário para um fluxo de trabalho específico no gabinete de fluxo laminar e use uma cultura de células ao mesmo tempo. Além disso, testes regulares para contaminantes como micoplasma proporcionam tranquilidade e confiança em seus resultados. Ao trabalhar em condições estéreis, o dinheiro gasto em pontas de filtro pré-esterilizadas e reagentes estéreis vale a pena.
