O meio de cultura celular deve conter nutrientes suficientes para suprir as substâncias e energia necessárias para as reações bioquímicas, como a síntese de novas células e o metabolismo celular. Os principais componentes do meio de cultura celular são água, aminoácidos, vitaminas, carboidratos, sais inorgânicos e outros nutrientes auxiliares. Portanto, devemos prestar atenção ao método de esterilização do meio de cultura de células e precauções relacionadas em experimentos diários.
cultura de células
1. Métodos de esterilização e precauções para diferentes meios de cultura de células
Os métodos de esterilização do meio de cultura celular são divididos em esterilização em autoclave e esterilização por filtração por membrana. Diferentes meios de cultura podem ter diferentes métodos de esterilização devido aos seus diferentes nutrientes.
Autoclave
Alguns meios, como o MEM, podem ser autoclavados, esses meios geralmente não contêm L-glutamina e bicarbonato de sódio e geralmente são adicionados após a autoclavagem. Além disso, glutamato de alta pressão (como L-alanil-L-glutamina) pode ser usado em vez de L-glutamina. O meio autoclavável é totalmente esterilizado com perda mínima de nutrientes a 121 graus, 15 psi e 15 minutos, sem prolongar o tempo de esterilização.
A maioria dos meios de cultura celular não são adequados para autoclavagem. Como o meio de cultura geralmente contém vitaminas, proteínas, polipeptídeos, fatores de crescimento e outras substâncias, essas substâncias são propensas à desnaturação ou perda de função sob alta temperatura ou exposição à radiação; portanto, os líquidos mencionados acima são principalmente filtrados e esterilizados para remover bactérias. Existem muitas membranas de filtro disponíveis para filtração e esterilização, e seus materiais são principalmente PES, nylon, policarbonato, acetato de celulose, nitrocelulose, PTFE, cerâmica, etc. A esterilização por filtração por membrana é um método comumente usado e conveniente atualmente. Membranas de filtro com tamanho de poro 0.2 μm são frequentemente usadas, e algumas usam tamanho de poro 0.1 μm. Em comparação com a filtração de alta pressão, as membranas têm uma vida útil e são mais caras, mas são menos destrutivas para os nutrientes no meio de cultura celular.
2. Precauções durante o armazenamento de diferentes meios de cultura celular
Geralmente, o meio líquido de cultura de células não deve ser congelado a -20 graus, porque os nutrientes podem ser precipitados durante o descongelamento, o que afetará o efeito da cultura. Em circunstâncias normais, deve ser armazenado a 2 ~ 8 graus longe da luz. Antes de usar, retire da geladeira e coloque em temperatura ambiente para equilíbrio. O meio líquido usual é válido por 6 a 12 meses. Tente evitar o armazenamento a longo prazo do meio líquido de cultura de células. A glutamina nele se decompõe lentamente com a extensão do tempo de armazenamento. Se o crescimento celular não for bom, você pode considerar testar o conteúdo de glutamina no meio para determinar se deve adicionar glutamina. . O meio de cultura celular líquido disponível comercialmente tem uma data de validade específica. Depois de usar o meio de cultura celular em pó seco para preparar o líquido, ele também deve ser armazenado em baixa temperatura (2 a 8 graus). Além da fácil degradação da glutamina no meio, outros componentes do meio também podem ser degradados ou precipitados com o aumento da temperatura.
